王爱义,薛跃奇(山东省青州第一中学;山东省胶州第一中学)
生物学教学. 2008, 33(9): 67.
在人教版高中《生物》选修3教材中,描述基因工程目的基因的检测与鉴定时,提到“检测目的基因是否翻译成蛋白质,是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原——抗体杂交,若有杂交带出现,表明目的基因已形成蛋白质产品。”笔者认为上述抗原——抗体杂交结果用“若有杂交带出现”直接表示,跨度太大,不好理解。我们知道,核酸分子之间的杂交,可用放射性同位素标记的DNA片段作探针,利用探针与待测DNA片段杂交,然后做放射自显影以显示结果,如显示出杂交带,就表明有目的基因片段。但蛋白质分子之间的杂交方法略有不同。蛋白质分子的杂交原理,主要是借助抗原和抗体在体外特异性结合后出现的各种现象,对样品中的抗原或抗体进行定量或定位检测。基本方法可分为两类:一类是利用可溶性抗原和抗体结合后,可生成不溶性免疫复合物,即在反应体系中形成沉淀,通过直接观察沉淀的生成来检查有无特定抗原或抗体。另一类是,待抗原抗体反应后,借助于仪器或其他手段进一步检测,例Western杂交。具体做法是:第一步,将目的基因在大肠杆菌表达蛋白质;第二步,将表达的蛋白质注射动物进行免疫,产生相应的抗体(一抗);第三步,从转基因生物中提取蛋白质,通过电泳将蛋白质分离;第四...