摘要：
本文对脂肪染色实验操作略作优化，对几种苏丹Ⅲ或Ⅳ染色液配方染色效果进行比较。结果表明： 使用0.1g苏丹Ⅲ干粉+20mL 95%乙醇，以及0.1g苏丹Ⅲ干粉+20mL 95%乙醇+5mL甘油两种配方配制的苏丹Ⅲ染色液，脂肪染色效果最佳。
正文：
1 前言
“检测生物组织中的脂肪”实验是人教版高中生物学必修1《分子与细胞》第2章第1节中的验证性实验。同时也是生物科学、生物技术专业大一年级学生植物学实验课程中的重要实验内容。在不同教材中都提供相应的苏丹Ⅲ或Ⅳ染料的配方，但在实际教学中，效果不甚理想，在显微镜下并未看到较清晰的细胞结构和明显的橘黄色脂肪颗粒。这一现象可能受到以下因素的影响： ①染料的配方和配制操作过程出现问题；②由于徒手切片技能较差，导致切片较厚；③染色时间较短。
针对这些原因，对该实验操作进行适当简化调整；同时以花生种子为材料，选择了6组苏丹Ⅲ或Ⅳ染色液配方进行脂肪染色效果比较研究，筛选出染色效果良好且适用于课堂教学与学生操作的苏丹染料配方。
2 实验材料与方法
2.1 实验材料与试剂 实验材料为花生种子；主要试剂有苏丹Ⅲ粉末、苏丹Ⅳ粉末、95%乙醇、无水乙醇、甘油、丙酮、蒸馏水。
2.2 试剂配方 挑选现今较为成熟、便于配制的6组苏丹Ⅲ染色液配方(表1)。
表1 6组苏丹Ⅲ或Ⅳ染色液配方
(注： 除去第6组配方，其余5组配方试剂在加入95%乙醇后，均进行过滤处理)
2.3 实验方法 参照人教版高中生物教材中“检测生物组织中的脂肪”的实验操作步骤，略作修改。
(1) 制片 为使学生能够获得较薄的花生种子组织切片，在切片时操作略作改动： 首先，取温水浸泡3～4h的花生种子，撕去种皮，分开两瓣子叶；其次，取刀片，用刀片在子叶内侧轻轻一刮；最后，用镊子夹住切开部位，小心撕取，可得到较薄的薄膜，置于滴有蒸馏水的载玻片上，并用镊子小心摊平。
(2) 染色 延长染色时间，染色10min后，用50%的酒精洗去浮色。
3 实验结果与分析
用显微镜观察6组不同配方苏丹染料染色的花生种子临时切片，发现使用不同配方染料，染色效果存在差异(表1)。配方1、配方2染色效果较佳，花生种子切片中可观察到大面积且分布均匀的橘黄/红色颗粒；配方6虽然染色效果较好，但细胞中仍存在部分脂肪颗粒未被染色；配方3染料染色效果一般，花生种子切片中可观察明显的橘黄色颗粒，但有较多区域细胞中脂肪颗粒未被染色；配方4、配方5染料组在显微镜下可看到花生种子切片整体呈深褐色，仅在极少数细胞中找到零星几颗橘黄色脂肪颗粒，且大多分布在切片边缘细胞中，说明染料效果差。
6组配方染料染色效果从好到差依次为： 配方1/配方2、配方6、配方3、配方4和5。
表2 不同配方苏丹Ⅲ或Ⅳ染色液对花生种子组织脂肪染色情况
4 结论
基于上述实验结果，使用配方1(0.1g苏丹Ⅲ干粉+20mL 95%乙醇)与配方2(0.1g苏丹Ⅲ干粉+20mL 95%乙醇+5mL甘油)染色液对花生种子临时切片的染色效果最佳，均可观察到细胞中含有大量明显的橘黄色脂肪颗粒，且不需要添加丙酮等挥发性有毒试剂，对人体伤害较小。其中配方1不含甘油，消耗原材料较少、操作简单，更为适合用于课堂教学。
(*通信作者)
主要参考文献
［1］ 赵遵田，苗明升． 2004． 植物学实验教程． 北京: 科学出版社，170 ～ 171
［2］ 何凤仙． 2000． 植物学实验． 北京: 高等教育出版社，4 ～ 5
［3］ 李正理． 1978． 植物制片技术． 北京: 科学出版社，119 ～ 120
